紫外光吸收法測(cè)定蛋白濃度試驗(yàn)程序
紫外光吸收法測(cè)定蛋白濃度：
1．用品和儀器：紫外分光光度劑，微量自動(dòng)取液儀。
2．試劑：標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)重的純凈蛋白質(zhì)，配成1mg/ml儲(chǔ)液置于4度中備用。
0.1mol/l磷酸緩沖液，PH7.4;0.1mol/l磷酸緩沖液，PH12.0。
3.試驗(yàn)程序：
1），在2個(gè)潔凈干凈的石英比色杯中（內(nèi)徑1cm）中加入蒸餾水或其他用于溶解標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)與待測(cè)樣品的緩沖液，其中一個(gè)作為參比杯（在以后測(cè)量不變），另一個(gè)作為樣品杯，放入分光光度劑的相應(yīng)位置。
2），記錄下空白杯在280260nm處的光吸收值，或?qū)χM(jìn)行250－350nm波長(zhǎng)范圍的基線掃描。
3），移去樣品比色杯中的蒸餾水或是緩沖液，干燥比色杯（用濾紙吸取殘液）。
4），在樣品比色杯中加入待測(cè)樣品液，在實(shí)驗(yàn)中提取樣品30ul加入2970ul雙證水，混勻，樣品液事先通過(guò)離心或用0.2um孔徑的濾膜過(guò)濾。
5），重復(fù)2步驟
6），蛋白含量計(jì)算：蛋白濃度（mg/ml）=1。55A280—0.76A260