細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建病毒法過程：

1、確定目標(biāo)細(xì)胞系的相關(guān)信息，細(xì)胞的培養(yǎng)條件，細(xì)胞的增值速度，支原體污染情況；

2、 預(yù)實(shí)驗(yàn)確定MOI值，可通過查閱文獻(xiàn)確定慢病毒在目標(biāo)細(xì)胞系中的MOI值也可參考查閱得到的數(shù)據(jù)，設(shè)計(jì)梯度實(shí)驗(yàn)，摸索合適MOI；

3、 預(yù)實(shí)驗(yàn)確定篩選藥 物用量，常用的藥 物篩選有：puro、G418、潮霉素等；

4、 細(xì)胞鋪板，將需要的細(xì)胞量接種于合適的培養(yǎng)皿中；

5、 細(xì)胞感染，通過接種的細(xì)胞量及預(yù)實(shí)驗(yàn)得來的MOI來計(jì)算添加的病毒體積；

6、 撤病毒，第2天，一般不超過24h換液；

7、 轉(zhuǎn)染48h后選擇對應(yīng)的抗性 藥 物進(jìn)行篩選；

8、 篩選結(jié)束后進(jìn)行單克隆化，選擇陽性克隆進(jìn)行培養(yǎng)。